Diabetologia：激活但功能损毁的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出口内自身特异性到显现出1M-心血管疾病针灸征状的重大突破所部在幼儿时期就有很好的描述，多个口内自身特异性乙M-肝炎的幼儿里面有70%在血清反转后10月内患上心血管疾病，而随访15年的幼儿这一比率缩减到84%。远比之下，占针灸1M-心血管疾病一半以上的M-1M-心血管疾病的发病机制还很难得到适当的数据分析。

愈来愈多的人开始运用于分期系统来定义1M-心血管疾病的重大突破：生殖在显现出多种口内自身特异性时离开第1阶段，显现出血糖异常时离开第2阶段，显现出征状时离开第3阶段。一些多发口内自身特异性乙M-肝炎的生殖，在1期和2期，重大突破较慢，并持续发展为发病的1M-心血管疾病。我们此前描述了一第举例来说在首次探测到多种口内自身特异性采样后至极少10年无心血管疾病的极慢重大突破者，这第举例来说病征人数极少，但特质非常清楚。随后，我们断定口内自身特异性特异性CD8+T细胞核反应在重大突破加速的病征里面前提不发挥作用，但在现阶段发病和则有的心血管疾病病征里面很容易探测到。这可能表明，与重大突破病征远比，这些病征胃溃疡反应的通气增强。

后期数据已经有，尽管通气性T细胞核(Treg)生产量正常，但心血管疾病病征发挥作用一些前提功能瑕疵，其里面包含对IL-2的反应能力减缓。此外，心血管疾病病征里面的震荡CD4+T细胞核可能对通气不够具抵抗性，乏善可陈为震荡T细胞核的抑止减弱，自然现象产生的Treg和肾脏产生的抑止Treg，以及特异性经历的CD4+T细胞核里面IL-2反应减弱。本数据分析的最终目标是描述了CD4+通气性T细胞核(Treg)在一小群极加速重大突破者里面的特质，他们的岁数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

原理：BOX数据分析是一项以人群为基础的纵向数据分析，在21岁一般而言确诊的病征亲属里面检查1M-心血管疾病的危险各种因素。我们此前描述了长期以来加速重大突破者的特质，他们保持多重口内自身特异性乙M-肝炎超过10年，但很难显现出心血管疾病的针灸征状，慢性或非同步进行性胃溃疡。随后，10名继续保持无心血管疾病并愿意包含大量血液采样的加速重大突破者纳入T和B细胞核前提功能数据分析。在现有的数据分析里面，8名慢重大突破者(SP第举例来说)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的口内自身特异性乙M-肝炎。所有的参加者都东南面1M-心血管疾病重大突破的1期，尽管一些人随后失去了口内自身特异性对某些特异性的乙M-肝炎反应，然而，一名病征已经东南面2期至极少6年，但很难显现出针灸征状，一名病征被诊断为心血管疾病，该成年人72岁，在采集科学实验采样时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析里面对该小分侄同步进行了之外评核。分离外周血单个核细胞核(PBMCs)，选用多参数流式细胞核绝技和T细胞核抑止试验评核小分侄里面Treg的频所部、特异性和前提功能。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和复归)同步进行无督导聚类数据分析，评核Treg特异性。

结果：与保健小分侄远比，来自慢重大突破体的失忆CD4+T细胞核的督导聚类结果显示，激活的失忆CD4+ Treg频所部缩减，与糖皮质激素抑止的TNFR相关细胞内(GITR)暗示缩减有关。一名HbA1c增大的病征与重大突破加速者和匹配的对照第举例来说远比，Treg谱有所不同。前提功能数据已经有，与保健小分侄远比，来自加速重大突破体的Treg介导的CD4+震荡T细胞核抑止引人注意受损。乏善可陈为对震荡CD4+T细胞核CD25和CD134暗示的抑止缩减。

上图1 系统地的特异性数据分析结果显示，CD4+Treg亚M-在慢重大突破队列里面缩减。由FlowSOM生成的Treg一楼，聚集在来自所有小分侄的活CD4+CD45RA -细胞核上。根据记号物暗示鉴定出10个元簇:失忆T细胞核_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T细胞核;HLA-DR + GITR +失忆T细胞核;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)运用于9个不同Treg记号生成的10个元簇的MST。每个节点代表一个集群(100个集群)，巨大的元集群(10个元集群)在节点第举例来说周围手工。每个节点里面的饼上图问到单个记号的暗示行政级别。(b)每个元聚类的热上图，以结果显示整体记号暗示。(c, d)为HD第举例来说(c)和SP第举例来说(d)生成上图，以及FlowSOM识别的每个元簇的很薄。(e-l)比起稀土元素为每个metacluster箱线或上图(稀土元素> 0.05%)具体为HD和SP第举例来说:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T细胞核(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T细胞核(l)。橙色左上角代表慈善机构SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对表示法秩检验。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 运用于CITRUS的预测模M-属实，Treg频所部的缩减是重大突破加速的图案。基准门控(a - f)和柑橘数据分析(g-k)比较SP参加者和匹配的HD参加者在CD4+CD45RA−T细胞核上的区别。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l个体的代表性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR暗示同步进行分离，模拟FlowSOM个体。(b) HD(黑点)和SP(斑点)第举例来说以及小分侄SP 606(橙色)里面CD25+ cd127的频所部简介上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控侄集的箱线或上图;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)龙眼簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示强度着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD队列之间的不同。(j)箱线或上图结果显示了在SP(斑点)和HD(灰点)第举例来说里面，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的比起稀土元素(比率)。(k)直方上图结果显示每个簇的特异性(黄色)和Treg记号比起暗示与或多或少暗示(白色);上列，闪存Treg_3;下面一行，闪存Treg_4。或多或少与所有其他簇里面记号的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对表示法秩检验

上图3 与保健献血者远比，重大突破加速者失忆treg的GITR缩减。每个失忆CD4+T细胞核元簇(失忆T细胞核_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T细胞核;HLA-DR + GITR +失忆T细胞核;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个暗示记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的暗示热上图(sp606不包含在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇里面所有HD(黑色)、所有SP(白色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR暗示串联，结果显示直方上图(c)和简介上图(d)。Wilcoxon配对表示法秩和检验，p< 0.07(橙色)所有小分侄包含，p< 0.05(白色)小分侄SP 606和匹配的HD不包含在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR暗示，从基准门控，从所有HD(黑色)、所有SP(白色)和SP 606(橙色)串联，结果显示直方上图(e)和简介上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对表示法秩检验

上图4 来自加速重大突破的CD4+ treg细胞核控制震荡CD4+T细胞核的能力减缓。SP第举例来说用白色的线或和左上角问到，HD第举例来说用黑色的线或和左上角问到，橙色的线或/左上角问到小分侄sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核同步进行分选。CD4+CD25−(转发者)被记号为CFSE, Treg按推论的比率指示剂。用抗CD3 /28微珠重置细胞核，培养出来3天后同步进行流式细胞核绝技探测。(a-d)与CD4+转发者比起应的treg培养出来(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培养出来。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑止百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止百分比。运用于乙M-肝炎对照(激活的响应细胞核不含treg)计算抑止百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 震荡CD4+T细胞核对加速重大突破的T细胞核重置的抑止不够引人注目。SP第举例来说用白色的线或和左上角问到，HD第举例来说用黑色的线或和左上角问到，橙色的线或/左上角问到小分侄sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核同步进行分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel记号，treg按推论的比率指示剂。用抗CD3 /28微珠重置细胞核，培养出来3天后同步进行流式细胞核绝技(CD25反染)和细胞核因侄数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者联合培养出来。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑止%-(b)。(c,d) CD25抑止%-(c)和CD134抑止%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养出来里面的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

事实：我们得出的事实是，来自加速重大突破侄的重置失忆CD4+Treg在GITR暗示里面得到了扩展和珍贵，突显了进一步数据分析Treg在1M-心血管疾病风险生殖里面的系统性的必要性。

出处出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28